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肉苁蓉水提物体外抗氧化及对小鼠肠道菌群 紊乱的作用(二)

发布日期:2021-12-07 12:31:00

性对照,计算其清除率。

清除率/%=(1-AA2x100

式中:A,为4mLABTS-溶液加1mL样液的吸光度:A。为4mLABTS*溶液加1mL蒸馏水的吸光度。1.3.2.4 肉苁蓉水提物中O2自由基清除率的测定

参照Luo等方法,稍作改动。配置不同浓度的肉苁蓉水提物溶液,325mm处测定吸光度,Vc为阳性对照,计算其清除率。

清除率院=[1-4-4)/Ax100

式中:A14mLTris-HC120μL邻苯三酚和1mL样液的吸光度;A24mLTns-HC120μL蒸馏水和1mL样液的吸光度:A34mLTris-HC120μL邻苯三酚和1mL蒸馏水的吸光度。

13.3 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱的作用

1.3.3.1 动物分组与样品采集处理

参照史瑛等方法,稍有改动。小鼠适应1周后随机分为4组,每组6只,分别为空白对照组、头孢克肟诱导肠道菌群紊乱模型组、肉苁蓉水提物低剂量组(1mgg)、高剂量组(2mgg)。肠道菌群素乱模型组头孢克肟给药剂量为30mgkg为成人剂量的10倍每天,第13次灌服头孢克肟,第2次灌服生理盐水。肉苁蓉水提物低(高)剂量第13次灌服头孢克肟,第2次灌服低剂量肉苁蓉水提物。空白组每天灌服3次相同剂量生理盐水。

每隔3d-4d测定体重,灌胃第0、7、14天,在无菌操作台下用灭菌管采集老鼠粪便,放入-20℃冰箱保存,最后一天灌胃结束后,颈椎脱臼处死小鼠,取心脏、胸腺、脾、肝脏、肺、肾、脑称量脏器质量计算脏器系数。并留取结肠组织样本于在10%的福尔马林中。

脏器系数=小鼠脏器(g)/小鼠体重(g

1.3.3.2 肠道菌群定量检测

参照王琳等方法,稍作改动。按表1肠道菌群培养条件将粪便稀释后,在相应的浓度下接种于不同的选择型培养基中,采用活菌计数公式计数,结果以每克粪便湿重中菌落形成的对数值形式表示以计算菌落总数(gCFUg)。并计算BE值。

每克粪便菌落数=lg(菌落总数x稀释倍数x每次稀释取样体积)/(接种体积x样品质量)

BE值=双歧杆菌菌落总数/大肠杆菌菌落总数

1.3.3.3 小鼠结肠组织病理学观察

小鼠处死后,立即取出新鲜的结肠,用生理盐水冲去肠内容物,置于10%中性福尔马林中固定。按常规方法脱水、透明、石蜡包埋,连续横断切片,切片厚5μmHE染色。使用光学显微镜拍照观察并比较结肠

1 肠道菌群培养条件

Table1 Calture conditions of intestinal flora

菌种

培养基

稀释倍数

培养条件

双岐杆菌

BBL培养基

10、10、10*

37℃.36h

乳酸杆菌

MRS培养基

10°、10、10*

37℃.36h

大肠杆菌

伊红美蓝培养基

10°,10.10

37℃.36h

肠球菌

PSE培养基

0101-01

37℃.36h

黏膜形态变化,测量结肠绒毛长度、隐窝深度、计算绒毛长度/隐窝深度比值(VC值)。

1.4 数据统计分析

试验数据以)表示。应用统计分析软件SPSS20进行两两比较单因素方差分析,P0.05表示差异显著,P0.01为差异极显著。

2 结果与分析

2.1 肉苁蓉水提物体外抗氧化作用

ABTS*自由基、DPPH自由基、0自由基清除率及还原力是体外抗氧化能力的检测指标,ABTS'自由基、DPPH自由基清除率的原理是通过提供H原子或质子清除自由基。O:自由基清除率是通过结合0自由基,阻止H2O2、单重态氧等的形成。还原力则是通过破坏自由基链,给出H原子并发挥抗氧化作用。图1为肉苁蓉水提物的体外抗氧化作用。

由图1D可知肉苁蓉水提物DPPH自由基清除率随浓度的增大而增加.0.3mgmL.时肉苁蓉水提

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DPPH自由基清除率最接近同浓度Vc0.3mgmL后肉苁蓉水提物DPPH自由基清除率增加速率减小。

12)可知肉苁蓉水提物对ABTS*自由基具有一定清除率,且与其浓度呈正相关,0.5mgmL时肉苁蓉水提物ABTS*自由基清除率最高为95.49%。VcABTS'自由基清除率始终维持在97%左右。

13)可知肉苁蓉水提物超氧阴离子自由基清除率明显低于Vc0.3mgmL.后超氧阴离子自由基清除率增长缓慢,0.5mgml.时肉苁蓉水提物超氧阴离子自由基清除率最高为32.69%。

14)可知肉苁蓉水提物及Vc的还原力均具有浓度依赖性,同浓度Vc还原力与肉苁蓉水提物相比增加速率较大。结果表明,肉苁蓉水提物具有良好的体外抗氧化作用,其DPPH自由基、ABTS自由基、O2自由基的IC,值依次为0.2251.81912.53mgml。肉苁蓉水提物具有良好的抗氧化能力可能由于其主要活性成分苯乙醇苷类化合物的苯环上具有多对邻酚羟基,这是使化合物具有清除自由基活性的关键结构。

2.2 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠的影响

2.2.1 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠体质量的影响

小鼠体质量会随机体生理变化发生改变,4组小鼠在不同灌胃天数下的体重变化情况见表2

由表2可知,灌胃第3天每组小鼠体重出现明显

2 小鼠体质量变化

Table 2 Changes in body weight of mice

组别

1d

3d

6d

9d

12d

14d

A

19.13320.457

17.46720.734

20.300±0874

21.067±1.446

20,567-0.907

19.300±1.041

B

18,6660.677

17,417±0.286

19,600-0.727

19.533±0.413

18.650=0.565"

18.033-0.266

C

9580700161

17.200±0.820

19,600x1.138

19.267±0.88241

19.267=1.086

18,967±0.852

D

19.333a0.665

17.833±0.784

20.333-0.712

19.833x0.612*

20.133:0.944

19,0670.532

注:A为空白对照组,B为肠道菌群素乱模型组,C为肉苁蓉水提液低剂量组,D为肉苁蓉水提物高剂量组:*表示与空白组相比有显著差异(PK0.05):**表示与空白组相比有极显著性差异(PO0D;#表示与模型组相比有显著意义(P0.05)。

降低,后缓慢升高,可能由于开始灌胃后引起小鼠应激反应使得体重下降。第9天前每组小鼠体重变化与空白组无显著性差异,第9天时与空白组相比其他3组体重有显著性差异(P0.05),第12天时模型组与空白组相比体重降低(P0.0D,肉苁蓉低剂量组与空白组体重降低(P0.05),肉苁蓉高剂量组体重变化与空白组相近(P0.05),第14天时模型组与空白组有显著性差异,肉苁蓉水提物低剂量与高剂量组无显著性差异,结果表明肉苁蓉水提物在一定浓度下能够控制由抗生素导致的体质量下降。

2.2.2 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠脏器指数的影响

脏器指数能间接反映营养物质在机体中的有效沉积、吸收和利用。4组小鼠脏器指数变化见表3

由表3可知,4组小鼠心脏、脾、肝脏、肺、肾、脑指数差异不显著(P0.05),而与空白组相比,模型组、肉苁蓉低剂量组和高剂量组胸腺指数存在显著性差异(P0.05),其中肉苁蓉水提物低剂量组胸腺脏器指数与空白组存在极显著差异(P0.0D,模型组与空白组相比胸腺指数显著降低,表明长期灌服头孢克肟对小


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