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肉苁蓉中功能因子测定及提取研究进展

发布日期:2022-01-10 10:04:00

摘 要:肉苁蓉具有较高的营养和保健功能。本文旨在分类总结肉苁蓉功能因子的提取及其测定方法,为肉苁蓉功能因子的提取、测定及相关领域的进一步研究提供参考。

关键词:肉苁蓉;功能因子;提取测定方法

肉苁蓉,多年生草本列当科肉苁蓉属植物,多寄生于藜科梭梭属植物的根部[1],生长于半荒漠和荒漠地区,主产于内蒙古自治区(阿拉善盟、巴彦淖尔市)、甘肃省、新疆维吾尔自治区等地。在历代中医补肾壮阳类药物中,使用肉苁蓉的频度很高,因为其功效显著,长于沙漠,被美誉为“沙漠人参”[2],2018 年被列为药食同源类植物。资料显示,肉苁蓉有益肾壮阳[3]、润肠通便[4]、护肝[5]、调节免疫力[6]、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳[1,7]、抗福射、保护神经系统与改善健忘等作用[8-10],遂引起了国内外众多学者的探究。本文综合有关肉苁蓉功能因子检测技术文献,旨在为肉苁蓉功能因子测定方法及提取工艺提供参考。

1 肉苁蓉的功能因子

从20 世纪80 年代以来,国内外学者对肉苁蓉的功能因子进行了大量的研究[11-12],并取得了极大的进展。研究者们对肉苁蓉进行了分析,从中分离得到28种苯乙醇苷类成分(见表1)[14-16];周玉碧等[17] 采用气相- 质谱联用法分析了肉苁蓉脂溶性提取物中的化学成分,共鉴定了73 种化合物。另外,文献报道肉苁蓉中还检出多糖类、黄酮类、环烯醚萜甙、木脂素类、生物碱、氨基酸与微量元素等化学成分[14,18]。

2 肉苁蓉主要功能因子的提取及测定

2.1 多糖类

多糖是肉苁蓉的主要功能因子之一,其具有抗衰老、抗肿瘤、调节免疫力等作用[19]。连乐等[19] 研究得出肉苁蓉多糖超声波提取工艺:料水比1 ∶ 25,提取温度60 ℃,提取时间75 min,含量为18.90%。肖星辉等[20] 探究得出水浸提法提取肉苁蓉多糖:料液比1 ∶ 55,温度75 ℃,提取165 min,多糖提取率为18.40%。高建德等[21] 确定了复合酶提取肉苁蓉多糖的最佳工艺:复合酶用量0.2%,酶解温度50 ℃,酶解1.5 h。肖道安[22] 采用蒽酮- 硫酸法测定肉苁蓉多糖含量,用吐温60 协同超声提取肉苁蓉多糖:表面活性剂为0.5% 吐温60,料液比1 ∶ 25,温度60 ℃,提取时间30 min,多糖得率为8.17%。裴爱田[23] 研究得出肉苁蓉粗多糖脱蛋白工艺:蛋白酶添加量125.6 U·mL-1,酶解温度30.0 ℃,酶解时间96.1 min,pH 为5.4。肖星辉等[20] 探究肉苁蓉最适去蛋白工艺为木瓜蛋白酶用量0.2%,温度50 ℃,时间2 h,多糖的保留率可达96.00%。

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在肉苁蓉多糖脱色方面,裴爱田[23] 的研究结果:活性炭添加量为2.5%,温度50 ℃,吸附40 min。肖星辉等[20] 认为AB-8 大孔树脂脱色优于活性炭脱色,其工艺为:上样浓度4 g·L-1,洗脱液为60% 乙醇,流速1 mL·min-1。

2.2 黄酮类

肉苁蓉黄酮类物质有改善睡眠、调节机体机能、抗衰老等功效。张瑞平[24] 研究乙醇提取法提取肉苁蓉总黄酮:乙醇浓度70%、料液比1 ∶ 30、提取时间2 h、温度40 ℃,提取率为9.33%。罗岩[25] 研究超声波辅助提取法提取管花肉苁蓉中黄酮类物质:乙醇体积分数70%,料液比1 ∶ 30,提取40 min,提取2 次,测定含量为8.45 mg·mL-1。杨凯等[26] 研究表面活性剂水溶液作为提取剂提取肉苁蓉总黄酮:水溶液提取剂为0.2%的十二烷基硫酸钠,料液比(g ∶ mL)1 ∶ 20,提取温度80 ℃,提取1.0 h,肉苁蓉黄酮的提取率可达7.34%。

肖星辉等[27] 研究乙醇- 盐双水相萃取法萃取肉苁蓉总黄酮的工艺:50%的乙醇,料液比1 ∶ 50(g ∶mL),提取时间3.5 h,温度90 ℃,总黄酮平均得率可达到(13.04±0.06)%; 最佳双水相分离体系为Et OHK2HPO4,

分离条件为70%EtOH、0.2 g·mL-1 K2HPO4,荒漠肉苁蓉提取液体积分数14%。徐常永等[28] 通过静态吸附实验,得到AB-8 型大孔吸附树脂分离纯化肉苁蓉总黄酮的工艺条件:最佳吸附条件,上样液浓度1.5 mg·mL-1,流速3 mL·min-1,pH=6;最佳解吸附条件,80% 的乙醇以3 mL·min 的流速洗脱,使用12 倍柱床体积,分离纯化后总黄酮的质量分数为72.35%。

2.3 苯乙醇苷

苯乙醇苷类化合物是肉苁蓉的主要功能因子之一,其主要成分为松果菊苷和毛蕊花糖苷[29],有着补肾壮阳、保护肝脏、抗氧化与调节免疫力等作用[30]。

2.3.1 苯乙醇总苷

丁慧玲等[31] 优化超声- 微波回流提取肉苁蓉中苯乙醇苷工艺,得到在超声频率40 kHz,功率50 W,提取15 min 时,最优工艺条件为丙酮体积分数50%,液料比14 ∶ 1(mL ∶ g),微波功率100 W,验证实验得率与理论值接近。黄翔等[32] 研究不同干燥方式对肉苁蓉中5 种苯乙醇苷类成分的影响,得出最佳提取工艺:甲醇体积分数55.14%,液料比46.39,提取时间38.50 min。刘丽莎[33] 等研究肉苁蓉苯乙醇苷水溶媒提取最佳工艺:原料粒径>40 目,料液比1 ∶ 15,80 ℃下浸提2 h,提取率为(175.9±1.1)mg·g-1。刘朋龙等[34] 应用AB-8 型大孔树脂分离纯化肉苁蓉苯乙醇苷:上样液浓度1.2 mg·mL-1,上样流速1.5 BV·h-1,吸附时间1.5 h;解析时间4 h,体积分数40% 的乙醇洗脱,洗脱流速1.5 BV·h-1。裴文静[29] 研究了高剪切均质化提取法纯化肉苁蓉苯乙醇苷:乙醇浓度50%,提取温度70 ℃,高剪切均质乳化机转速16 000 r·min-1,高剪切均质乳化2 min,料液比1 ∶ 9,

提取1 次。余逸凡等[35] 优化了大孔吸附树脂分离纯化荒漠肉苁蓉总苷的工艺条件。结果表明,D-101 为纯化的较佳树脂,上样液浓度2.0 mg·mL-1,流速2 mL·min-1;洗脱液体积6 BV 为较佳吸附条件,该条件下纯化后总苷含量为纯化前的28.85 倍。

2.3.2 松果菊苷

周海燕等[36] 采用HPLC 法, 以C18 为色谱柱,甲醇-0.1% 甲酸为流动相, 梯度洗脱, 体积流量1.0 mL·min-1,柱温35 ℃,检测波长330 nm,松果菊苷在0.025 5 ~ 0.612 0 mg·mL-1 范围内线性关系良好,平均回收率为100.59%。初侨等[37] 采用闪式技术提取肉苁蓉中松果菊苷:60% 乙醇,闪提转速5 500 r·min-1,提取90 s,料液比1 ∶ 30(g ∶ mL),松果菊苷的提取率为8.87 mg·g-1。王怀煦[38] 探究采用大孔树脂纯化肉苁蓉中松果菊苷的工艺:大孔树脂运用HPD100,6 BV 的50% 乙醇洗脱,气平均收率为91.4%。

2.3.3 毛蕊花糖苷

初侨等[37] 采用闪式技术提取肉苁蓉中毛蕊花糖苷,最佳提取工艺同初侨的松果菊苷提取工艺,毛蕊花糖苷的提取率为6.60 mg·g-1。孔征等[39] 优化提取肉苁蓉毛蕊花糖苷最优工艺为乙醇浓度63%、液料比8 ∶ 1(mL ∶ g)、浸泡2 h、提取1.5 h、提取2 次。李明国[40] 建立了肉苁蓉中毛蕊花糖苷的高效毛细管电泳测定方法:电压8 kV,运行缓冲溶液30 mmol·L-1 硼酸- 硼砂(pH=9.0),室温,检测波长334 nm。毛蕊花糖苷的浓度在0.015 ~ 0.375 mg·mL-1范围内线性关系良好,样品回收率为99.26%。孔征等[38] 测定肉苁蓉毛蕊花糖苷含量,采用高效液相色谱法:色谱柱为Inertsil-ODS-3V,甲醇-0.2% 甲酸水溶液(40 ∶ 60,V ∶ V)作为流动相,进样量10 μL,流速1 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长330 nm。毛蕊花糖苷检测质量浓度的线性范围为18.65 ~ 932.4 μg·mL-1。

2.3.4 红景天苷

李明国等[41] 建立高效毛细管电泳色谱法测定肉苁蓉中红景天苷含量的方法。采用毛细管区带电泳(CZE):运行缓冲液30 mmol·L-1 硼酸- 硼砂缓冲液(pH=9.00),电压8 kV,柱温25 ℃,波长278 nm,红景天苷含量在0.007 ~ 0.140 mg·mL-1 的浓度范围内线性关系良好[40-41]。

2.4 多酚类物质

张春玲[42] 研究建立了紫外- 可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚类物质(以没食子酸计)含量的方法:70% 的乙醇、料液比为1 ∶ 20、60 ℃、提取30 min,肉苁蓉中多酚类物质的提取效果最好,平均质量百分比为0.242 2%。栾朝霞[43] 优化大孔树脂纯化肉苁蓉多酚提取物:适用HPD-400 大孔树脂,上样溶液60 mL,6 mg·mL-1,流速2 mL·min-1;采用60% 的乙醇180 mL、1 mL·min-1 流速洗脱。

3 结语

肉苁蓉主要功能因子的提取及测定方法较多,笔者对常用方法进行了归纳总结,选出每种测定方法的最优工艺条件供读者参考。

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